晓平说消毒：医疗机构环境表面微生物学检测技术之三：微生物实验室的准备
专家：倪晓平
专栏编辑：丁韧
医疗机构环境表面微生物学检测技术之三：
微生物实验室的准备
采样工作经过制定计划、物品准备、标本采集之后，采样人员的任务就算基本完成啦！本期倪教授为大家带来的是微生物实验室的准备，包括培养基的验收与质控，设备及检测方法的质控等丰富内容。
想要让我们采集的标本检出准确的结果，那就不要忘记将此文分享给微生物实验室的老师们哦！
计划、流程、SOP是基础：微生物实验室应根据院感科或一线业务科室的年度计划，做好微生物检测的全年工作安排，除发生特殊事件需要开展额外检测需求外。由于任何随意改变环境采样方法、标本接种方式、培养基配方和培养方法等的行为都会影响微生物的检出率。因此，建立日常工作流程与标准化操作规范（SOP）对于每一家微生物实验室而言都显得十分重要。
医疗机构环境表面检测的微生物实验室主要的准备工作如下：
一、培养基的验收
可依据GB 4789.28-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商，同时要求供应商提供：培养基成份、名称、产品编号、批号、使用前pH值、储藏要求和有效期、性能评价等相关的技术参数资料。
每个微生物实验室应指定专人开展培养基接收和验收工作，仔细核对生产企业提供的资料，对培养基进行质量检测，结果审定与记录，满足检测要求后可投入使用。每次验收后应形成完整的验收记录，并存档备查。
自行配制培养基的实验室，应按培养基原料要求进行储藏，开瓶后的干粉培养基要注意防潮，如发生培养基结块、颜色异常和其他变质等现象就不得再次使用。
二、培养基配制质控
培养基配制用水应符合GB 4789.28-2013相关指标。按培养基配方要求配制后测试pH值，可使用1mol/L NaOH或1mol/L HCL进行调整。按要求灭菌后冷却后，倾倒无菌平皿使用，或4℃冷藏保存备用。制备好的平皿如需要长时间保存（超过2d），应将其放入密封的塑料袋中保存，以防止营养琼脂平皿的干燥；配制好的液体培养基如需要长时间保存（超过2w），应采用带有螺旋盖的蓝口瓶密闭，防止液体的蒸发。
微生物人员正在配制培养基
三、培养基性能测试
配制好的培养基应有相应的颜色，使用应观察颜色是否发生变化，是否发生水分蒸发/干涸皲裂。每批配制好的培养基中选出部分进行阳性、阴性质量控制测试，培养基培养24h后确定目标菌生长良好，或无菌生长方可使用。每次培养基性能测试后应形成完整的记录，并存档备查。培养基性能测试的测试菌株应选择具有代表种的、稳定特性，并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的标准菌株，菌株应来源于国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株。
四、设备的质控
用于微生物检测培养的每一设备和软件均应有唯一性标识。微生物实验室主要设备包括，培养箱、冰箱、压力蒸汽灭菌器、生物安全柜等。这些仪器设备在投入使用前应进行性能鉴定，以确定其满足检测要求和符合有关标准规范，同时每年都应送检至检定部门进行检定，检定符合试验要求方能继续使用。检测的内容包括温度、湿度等相关技术指标。设备的性能监测与鉴定工作可委托有资质的第三方检测机构。监测与鉴定报告应存档备查。
培养箱要放置在阴凉、干燥、通风良好、远离热源和日晒的地方。放置平稳，以防震动发生噪音。为保证冷凝器有效地散热，冷凝器与墙壁之间距离应大于10cm，箱体侧面应有5cm间隙，箱体顶部至少应有30cm空间。需培养样品应首选放置在培养箱中部，物品放置不能过挤，必须留出空间。
需要灭菌的采样工具，如试管、蓝口瓶等最佳选择是送医院中央消毒供应室集中灭菌；含有液体的试管（瓶）应采用重力置换型（即下排气型）进行灭菌。由实验室自行灭菌的，应参照《医院消毒供应中心第3部分：清洗消毒及灭菌效果监测标准》WS 313.3-2016开展压力蒸汽灭菌器的质控监测，内容包括物理监测、化学监测和生物监测，并做好监测结果的审定与记录，备查。
生物安全柜必须具有合格的出厂检测报告。对于新安装的生物安全柜，必须现场检测合格并出具检测报告后才可使用。生物安全柜一年一度由有资质的监测部门进行常规性检测。生物安全柜的现场必测项目应符合要求，必测项目不合格的生物安全柜不得使用。出现下列情况之一时，也应对生物安全柜进行质量检测：生物安全实验室竣工后，投入使用前，生物安全柜已安装完毕；生物安全柜被移动位置；对生物安全柜进行较大的检修；生物安全柜更换高效过滤器后。
五、检测方法的质控
科学的检测方法是保证检测工作质控的关键。应优先选择国际和国家行业发布的最新的、有效的标准版本进行检测工作，按照程序文件的要求编写作业指导书。与检测工作相关的作业指导书、标准、SOP手册、参考文件应保持现行有效，并放置在工作场所，方便检测人员取阅使用。当相关检测方法发生变更时，应及时组织相关人员进行修订确认与受控。
下期预告：感控老师们最应该明白的问题——现场采样注意事项！
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图文编辑：小小牧童
